肝脏是药物代谢和毒性研究的重要器官，原代肝细胞（Primary Hepatocytes）具备完整的细胞特征和必要的酶、辅助因子。这些细胞不仅包含膜结合酶（例如细胞色素P450混合功能氧化酶），还包含胞质酯酶，涵盖肝脏所有代谢途径。因此，原代肝细胞被广泛视为构建体外肝脏模型的金标准，受到药物代谢和相互作用研究者的青睐。本文将综述基于原代肝细胞的二维（2D）与三维（3D）培养模型及其在药物研发中的应用。

一、原代肝细胞分离

原代肝细胞的分离通常采用两步胶原酶灌注法。小动物通过门静脉或下腔静脉进行灌注，较大动物则通过肝叶或肝节段进行。成功分离肝细胞的关键因素包括：使用无细胞毒性的胶原酶、合适的消化时机（消化不足或过度均会影响细胞活力），以及肝脏良好的生理状态。对于药物研究的标准，要求实验开始时活率达到80%，实验过程中活率下降低于20%。

二、原代肝细胞2D培养

悬浮肝细胞（Suspension Hepatocytes）模型具备完整的药物代谢酶，适用于不同的代谢清除途径研究。尽管如此，随体外孵育时间的增加，其活率与酶活性逐渐减少，通常限制孵育时间为4小时。传统的悬浮肝细胞模型对慢代谢化合物的清除率预测有一定局限性。因此，采用悬浮肝细胞接力法，可将孵育时间延长至20小时，适合研究小分子药物的酶活性和代谢稳定性。

贴壁肝细胞（Plateable Hepatocytes）模型则在胶原蛋白包被的培养基上生长，呈现上皮形态。尽管这种方法有助于评估药物相互作用或肝毒性，但单一贴壁肝细胞的培养存在细胞极性改变、缺乏其他相关细胞与营养支持的问题，应用范围需要谨慎。

三、原代肝细胞3D培养

球状体（Spheroid）模型采用超低粘附培养等技术，使原代肝细胞聚集成球状。而肝类器官（Liver Organoids）模型则通过干细胞或组织来源细胞生成，能较好地再现原生组织微环境，适用于分析遗传性或感染性肝病。与成熟肝细胞相比，类器官的培养在保持细胞功能和基因组稳定性方面具有优势，但在长时间培养中仍面临挑战。

四、原代肝细胞共培养模型

2D原代肝细胞共培养模型结合了多种细胞类型，允许细胞之间及细胞与基质间的相互作用，从而维持原代肝细胞的功能。共培养与成纤维细胞、非实质肝细胞或T细胞的联合应用，可以在药物性肝损伤研究中得到更全面的数据。

总之，尊龙凯时致力于为生物医学研究提供高质量的原代肝细胞培养服务，推动药物研发的进步。通过多种属的原代肝细胞分离与培养，我们希望助力科学界更好地进行药物体外研究，期待成为广大科研人员信赖的合作伙伴。