尊龙凯时提供的HL-7702人肝正常细胞（L-02）培养说明书包含以下重要信息：

一、细胞培养条件

细胞名称：HL-7702人肝正常细胞（L-02）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：第一次建议1:2传代；每两天更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基，以便对比培养，如对比效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后处理

细胞收到后，应培养至良好状态，填满完全培养液并封好瓶口，确保运输细胞的最佳状态。

操作步骤如下：

1. 用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后放入超净台中进行无菌操作。
2. 将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。
3. 观察细胞生长情况并记录不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据。如未提供照片，默认为状态良好。
4. 传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后轻松拧松瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超80%，则可进行传代，具体步骤为：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态后迅速终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，然后吸出这部分液体，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

在细胞覆盖培养瓶80%时，进行以下操作：

1. 弃去培养液，使用PBS清洗一次细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞收缩情况，处理后轻轻吹打使之脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，后需转入液氮者，需在-80℃存放24小时以上。

c. 细胞复苏

复苏步骤如下：

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴解冻，放入75%酒精消毒。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，重悬细胞于5ml完全培养基，然后接种至T25培养瓶，放入培养箱中继续培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中，某些细胞可能会脱落，这属于正常现象。若脱落较多，可将所有培养液收集至离心管，进行重悬处理，并匀速分瓶传代。若有异常情况，按上述步骤进行恢复。

五、售后条款

尊龙凯时承诺以下售后服务：

1. 在运输过程中，如遇细胞丢失、破损等情况，我们会重新发货。
2. 对细胞污染问题，需要在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重发。
3. 如细胞长时间存活失败、不符合标准，需提供相关照片，依据情况重发。
4. 细胞活性问题需在收到产品7天内提出，我们会依据相关操作步骤和沟通情况作出判断。

请客户务必按照要求操作，以确保细胞的生长和活性。