尊龙凯时品牌的乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒,作为一种重要的生物医学工具,能够有效地催化丙酮酸与乳酸的转化,同时也促进NADH与NAD+之间的相互转化。LDH广泛存在于所有细胞类型中,且是一种稳定的酶,其在细胞质膜受损后迅速释放到培养基中,因此常被用作细胞毒性研究中的主要标记。
该检测方法主要基于细胞与细胞毒性化学试剂或细胞毒性细胞(如NK细胞和细胞毒性T细胞)共同培养,旨在诱导目标细胞死亡并释放LDH。实验步骤包括将含LDH的上清液转移到新的96孔测定板内,并与LDH反应溶液混合。在LDH的作用下,NADH与四唑盐MTT反应生成NAD+与还原形式MTT,而还原形式的MTT在565nm波长下表现出最高的吸收值,颜色强度则与裂解细胞数成正比。
在进行LDH检测时,重要的步骤包括:
- 确定药物的适用性,进行初步实验以评估药物对LDH释放的影响。
- 培养细胞超过24小时,离心去除颗粒,获得细胞培养上清。
- 将细胞培养上清分配到96孔培养板中,并设置适当的对照组。
- 向某些孔中添加药物,检验其对LDH释放的影响。
- 通过酶标仪读取吸光度以评估细胞毒性。
结果计算采用以下公式,以确定“细胞毒性百分比”:
细胞毒性百分比 (%) = (A样本 - A自发) / (A最大释放 - A自发) × 100
其中,A样本为毒性试剂处理样本在565nm处的吸光度,A自发为对照样本的吸光度,A最大释放为使用100%溶液时的吸光度。
尊龙凯时的LDH检测试剂盒,为生物医学研究提供了高效、准确的细胞毒性检测方法。在应用此方法时,需遵循严格的实验规范和步骤,以确保结果的准确性和重复性。