一、细胞培养条件

细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640（含NAHCO3 15g/L） + 10% FBS + 1% P

传代方法：建议第一次以1:2的比例传代，换液的时机为2天。建议使用无菌离心管收集培养基，并做好过渡对比培养，以便后续数据的获取。如果对比培养效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，将其培养至良好状态，然后用完全培养液灌满并封好瓶口。在收到细胞后，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，确保在超净台内进行严格的无菌操作。把细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。使用显微镜观察细胞的生长情况，并进行不同倍数拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如果不提供照片，则默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后将瓶盖稍微拧松。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果未超过80%汇合度，将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，然后放入37℃、5% CO2孵箱培养。如果细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

弃去上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞的消化情况。如果细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。弃去上清后，补加1-2ml完全培养基重悬。
将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀细胞，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如果后期要转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管时，请注意佩戴防护面具。迅速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会发生细胞脱落，这是正常现象。如脱落较多可将培养瓶中的所有培养液集收至离心管内，进行1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期可进行对比培养），沉淀细胞后添加1-2ml胰蛋白酶轻轻吹打，消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，重悬时补加1-2ml完全培养基。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

尊龙凯时提供的细胞如果出现问题，重发的情况有： 1. 细胞在运输途中遭遇各种问题（如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等）。 2. 收到细胞48小时内，如果发现细胞污染问题，需提供真实的实验结果，核实后重发。 3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发。 4. 干冰冻存发货的细胞恢复后24小时后或常温发货的细胞静置4小时未开封且出现污染，亦可重发。 5. 细胞活性问题需在收货7天内提出真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发。 6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，超过3天未告知的视为产品合格。 7. 在4-7天内出现问题的，需提供收到细胞前3天的照片、出现问题时的照片及相关操作的详细步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判断是否为我方责任。如由技术人员判定为双方责任，将由双方协商处理，或按合同价格的50%收取重新发货费用。

尊龙凯时始终致力于为客户提供高质量的细胞材料和优质的售后服务。如有任何问题，请及时与我们联系。