在对各种生物医疗产品中的农残和有机物进行分析时,样品的萃取物通常会含有大型分子物质。如果不去除这些杂质,可能会导致色谱柱的分离效率降低,同时还会缩短进样口和色谱柱的使用寿命,从而影响数据分析结果。因此,在进行农残和有机物样品分析之前,必须进行有效的净化前处理。
传统的前处理方法通常耗时较长且需要大量溶剂,因此,凝胶渗透色谱(GPC)的广泛应用正成为一个必然趋势。GPC,或称为体积排斥色谱,是一种使用溶剂作为流动相,通过多孔填料进行分离的液相色谱方法。其分离组件是以多孔性凝胶为载体的色谱柱,凝胶的表面和内部充满了大小不一的孔洞。这种方法的仪器包括泵系统、自动进样系统、凝胶色谱柱、检测系统以及数据采集和处理系统。
GPC的分离机制可以用“空间排斥效应”来解释。通过外力将含有样品的流动相(可能是气体、液体或超临界流体)推送通过固定相表面,在这个过程中,样品成分会在两相中进行不同程度的相互作用。那些与固定相作用程度较强的成分流出速度较慢,而与固定相作用较弱的成分则流出速度较快。由于流出的速度差异,样品成分最终形成独立的“带”或“区”,从而可以分别进行定性和定量分析。
根据所使用凝胶的特性,GPC分为两种类型:使用水溶液的凝胶过滤色谱法(GFC)和使用有机溶剂的GPC。其基本分离原理是基于分子尺寸。较大的分子无法进入凝胶中的孔洞,被排斥在外,优先被洗提出来。而较小的分子可以进入孔道,因此滞留时间较长,最后才被洗出。这一过程与其他色谱法显著不同,使GPC成为有效的分离和分析工具。
GPC方法的应用原因主要有以下几点:首先,相对分子量的分布(多分散性指数)对聚合物的性质有重要影响;其次,随着人们对相对分子质量分布的关注,经典方法已无法同时测量聚合物的分子量分布。而GPC的应用则改善了测试条件,使其能够快速且有效地测定高分子的相对分子质量及其分布。
在使用GPC的方法时,有几个常见问题需要注意:选择适当的溶剂,以确保其能溶解多种聚合物且不腐蚀仪器部件,同时与检测器相匹配;激光光散射与凝胶色谱的联用可以在获取浓度谱图的同时,得到散射光强度及分子量分布曲线;样品准备时需要严格进行除尘,溶剂和样品都需经过严格过滤;色谱柱的选择应依据所用的溶剂和样品分子量范围等。
在GPC仪器的使用中,还需确保其载体具备良好的化学和热稳定性、机械强度、低流动阻力,并对样品没有吸附作用,同时分离范围越大,效果越好。进样体积需控制在50-100 μL之间,确保浓度在0.05%-0.5%之间。此外,GPC系统的平衡需要通过适当的流动相冲洗系统来完成,确保基线平稳后再开始分析。
总之,凝胶渗透色谱(GPC)作为一种强有力的分析工具,将在生物医疗分析领域发挥越来越重要的作用。通过结合尊龙凯时的先进技术,改进了样本分析的效率和准确性,使其在行业中的竞争力不断提升。