尊龙凯时的人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S
贴壁传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：每2天更换培养液
备注：建议使用无菌离心管收集培养基以供比较，如对比培养效果不理想，建议购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞接收后处理

细胞在培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳做法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置在超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以使细胞状态稳定后再进行处理。务必用显微镜观察细胞的生长情况并拍摄不同倍数的照片保存（建议每种倍数各拍一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片将默认收到状态良好。建议在传代后，一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将完全培养液收集于离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2的培养箱继续培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：
1. 去除培养上清，用不含钙镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其移至操作台，轻轻敲击培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶的80%时，去除T25培养瓶中的培养液并用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，然后轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟；
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中；
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，若后期需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转移至液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，待冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟；
3. 弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2细胞培养箱继续培养；
4. 第二天更换为新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在运输中脱落，这是正常现象。如细胞脱落情况严重，请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，进行离心并收集上清作过渡培养，然后加入1-2ml胰酶处理，轻轻吹打后重悬。消化1-2分钟后，再加5ml完全培养基终止反应。随后离心，弃上清，加入1-2ml完全培养基重悬。最终按1:2比例进行传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发的情况

以下情况可进行细胞重发：
1. 运输过程中遇到问题（细胞丢失、瓶体破损、培养液漏液等）。
2. 收到产品后48小时内反馈细胞污染问题，核实后重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰冷藏细胞复苏后24小时内若大多数细胞未存活，需提供真实照片来重发。
4. 收到产品后24小时内如出现污染，核实后重发。
5. 在收货后7天内，提交真实实验结果用于细胞活性的检验，确认后将重发。
6. 收到细胞的当天以及第2、3天拍的照片为重要依据，3天未反馈将视为产品合格。

2）不予重发的情况

以下情况将不进行细胞重发：
1. 客户造成的细胞污染。
2. 客户不当操作导致细胞状态不良。
3. 未按尊龙凯时推荐的培养体系造成日后的细胞生长不良。
4. 未提供细胞培养前三天的照片。
5. 细胞培养时经过其他处理。
6. 收到后2天内未反馈情况。
7. 其他具体情况而定。