尊龙凯时人胰腺癌细胞HPAFⅡ的培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

贴壁传代方法：首次建议以1:2比例进行传代。传代情况：每2天换液。备注：请使用无菌离心管收集培养基，作为对照培养使用。若对照培养效果不佳，建议直接采购尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞达到良好状态后，将其灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台内严格遵循无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片将默认收到状态良好。

在进行传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一区瓶使用自配的完全培养基，以便进行对照培养，换液后请将瓶盖轻松拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，则可以进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，随后在显微镜下观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，快速将培养瓶送回操作台，轻轻敲打几次后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基进行重悬。
4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），再补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞变化。待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液，混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如果后期需要转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后用75%的酒精擦拭管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞贴壁性不强，运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如若脱落较多，请将培养瓶中的培养液收集至离心管中，进行1000rpm离心5分钟，收集上清作为对照培养。然后沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止消化，最后再离心，并加入1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放回37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1) 可重发的情况及判定标准

1. 若细胞在运输途中遭遇诸如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况，可进行重发；
2. 细胞污染问题请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后进行重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后及干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，大部分细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时内且未开封，出现污染，则可重发；
5. 细胞活性问题请在收到产品7天内提供真实实验结果，利用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发；
6. 收到细胞的当天以及第2、3天拍照，若3天内未告知，则视为产品合格。若4-7天内出现问题，须提供收到细胞前三天的照片及问题照片和操作详细步骤，与技术人员沟通后判定责任，必要时可进行重发。

2) 不予重发的情况

1. 如因客户造成的细胞污染，不予重发；
2. 因客户不正确操作导致细胞状态不佳，不予重发；
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不予重发；
4. 若细胞状态不佳且未提供细胞培养前三天照片的，不予重发；
5. 在细胞培养时进行其他处理的，不予重发；
6. 若在收到细胞的2天内未告知的，不予重发；
7. 其他情况根据具体情况而定。

感谢您选择尊龙凯时的细胞培养产品，我们将竭诚为您提供优质服务！