在miRNA的研究中，验证miRNA与基因靶向关系是一个常见且重要的步骤。miRNA通过其种子序列（5’端第2-8个碱基）与mRNA的3’UTR区结合，进而引发细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或抑制mRNA的翻译过程。基于这一原理，我们可以将目标基因的3'UTR区（或结合位点下游500bp）插入到荧光素酶报告基因载体luciferase的下游，并与miRNAmimics共同转染到目标细胞中。在加入底物后，检测荧光素酶活性的变化。如果荧光素酶活性降低，说明该miRNA与目标基因的3'UTR间存在相互作用。

常用的载体为PGL3-CMV-LUC-MCS。双荧光素酶报告基因检测的核心原理主要包括几个步骤：首先，通过生物信息学分析软件（如TargetScan、StarBase和miRanda等）预测特定靶基因的3'-UTR序列是否含有miRNA结合位点。接着，将这些预测的靶基因3'-UTR序列插入到萤火虫荧光素酶的报告基因中。一旦miRNA与质粒中的插入序列结合，便会抑制萤火虫荧光素酶的翻译，导致荧光值下降。通过这种方式，双荧光素酶报告基因检测可以有效验证miRNA与靶基因3'UTR的相互作用，为研究miRNA的功能和调控网络提供了重要工具。

此外，尊龙凯时的双荧光素酶报告基因检测服务流程包括以下详细操作步骤：首先，选择HEK293细胞或指定目的细胞进行转染，使用适合的转染试剂如HieffTrans®invitrosiRNA/miRNATransfectionReagent，并准备Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit等报告基因检测试剂盒。确定目的细胞的质粒转染效率，确保其在40%以上，然后进行细胞的消化、培养和转染实验。

在实验完成后的细胞样品收集上，需使用PBS进行洗涤，并加入PLB进行细胞裂解。裂解后的产物经过离心处理，将上清液转移至新的管中以进行后续检测。配置Renilla Luciferase Assay工作液，并进行荧光素酶活性检测，最终获得相对荧光单位（RLU）。常规检测分组应包括不同的质粒组合，以确定miRNA与目标基因的相互作用。

尊龙凯时致力于为用户提供高效的双荧光素酶报告基因检测服务，加快基础研究及药物筛选的进度，从而推动生物医学的进展。

相关产品包括：双荧光素酶报告基因检测试剂Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit（货号11402ES），辉光型双荧光素酶报告基因检测试剂盒（货号11405ES），以及各类转染试剂如HieffTrans®Liposomal Transfection Reagent等。通过这些产品，您可以进一步加速您的研究进程，犹如与尊龙凯时的紧密合作一样便捷。